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桂花叶枯病调查及病原的鉴定_罗萍

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发表于 2014-5-19 09:43:37 | 显示全部楼层 |阅读模式
    摘要:取四川农业大学桂花树(Osmanthus)的南北方向各一枝条,对其叶片总数以及病叶总数进行调查,确认其发病率为87.27%和感染指数为25。以此判断行道桂花树的叶枯病发病状况。在此基础上,对桂花叶枯病的病原进行柯赫假定验证。对病叶进行分离,有三种真菌较优势,将三种菌分别接种到健康植株上,有两种真菌接种的植株发病,其中一种真菌接种后的发病症状与原来桂花叶枯病的症状相同,对病叶进行再分离鉴定,确认桂花叶枯病系交链孢菌属(Alternaria)真菌侵染所致。
    叶枯病是我国南北各地较普遍发生的园林、观赏植物病害,主要发生在叶片上,多从叶尖、叶缘开始发病。叶片受害后,先产生褪绿色的病斑,并逐渐向内扩展,病斑与健康组织处的界限明显。后期病斑呈干枯状,表面上出现黑色粒状物,即病原菌的分生孢子器[1]。
桂花叶枯病又称霉灰枯病,主要侵染桂花叶片[2]。病害从叶缘或叶尖发生,病叶初始出现圆形或不规则形大斑块,灰褐色,边缘深褐色;后期病斑上着生黑色小点并相互融合,使叶片大面积干枯。一般在越冬后的老叶上发病较多,在高温、高湿、通风不良的环境下,植株生长衰弱,发病严重。高温季节极有利于叶枯病的发生,往往引起大量叶片干枯脱落,有的还会造成寄主整株死亡[3]。对于桂花叶枯病病原的研究也存在争议。故本文以行道桂花树为对象调查发病状况,并对其病原进行鉴定。
    1 材料与方法
    1.1 试验材料
    培养皿、三角瓶、超净工作台、智能人工气候箱(RXZ-30C)、手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温鼓风干燥箱、显微镜、PDA培养基、桂花病叶、健康的
    1a生桂花枝条。
    1.2 试验方法
    1.2.1 调查方法
    在发生叶枯病的桂花树上分南北方向各取一枝条,确认其叶片总数以及病叶总数,并取病叶作为病原物鉴定原材料。
    1.2.2 鉴定方法
    通过柯赫假定确认病原物。并根据菌落形态,孢子类型,产孢结构,菌丝颜色等判断其科属[4]。
    2 结果与分析
    2.1 桂花叶枯病发病状况调查
    根据直接计数法:发病率=(调查病株数/调查总株数)×100%[5],从表1可求得其发病率为87.27%。
20140519093940.png
20140519094032.png
    根据分级计数法:感染指数=∑(病级株数×代表数值)/(株数总和×发病最重级的代表数值)×100[5],从表2可求得其感染指数为25。
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    (注:发病最重的感染指数是100,无病的是0。感染指数是将发病率和严重度合在一起,用一个数值来代表发病程度,对调查和试验结果的分析是有利的。)
    2.2 病原物的鉴定
    将培养的菌按其菌落特征(菌落颜色和形状、菌丝形态等)进行粗略归类,有3种菌较优势。记录3种优势菌菌落形态特征(表3)。
20140519094148.png
    将3种优势菌分别接种到健康的1a生桂花叶片上,每片接种的健康叶片均设置3处机械损伤,每个样本设置30片重复叶片,共90个重复。设置两个对照:CK1—无机械损伤的健康叶片;CK2—有机械损伤但不接种的健康叶片。
    一号菌接种后不发病,二号菌和三号菌发病。两种菌的发病状况均为:机械损伤处开始枯死,致使整个叶片死亡。二号菌发病时间早于三号菌。接种二号菌的叶片的发病症状与叶枯病症状一致;但是,接种三号菌的叶片的发病症状与叶枯病症状存在差异。
    将发病叶片再次分离。二号菌和三号菌均分离出来,说明二号菌和三号菌均能侵染健康的桂花叶片。但是由发病症状,可判断二号菌是病原菌。由二号菌的菌落特征及孢子形态等可判断为半知菌亚门,丝孢纲,丝孢目,暗色菌科,交链孢菌属真菌。该属菌落铺展,通常灰色,暗黑褐色或黑色;菌丝无色,橄榄褐色或褐色;很少形成子座;分身孢子梗分化明显,不分枝或不规则稀疏分枝,淡褐或褐色,散生或簇生,孢梗暗色,单枝,长短不一;分生孢子串生或单生,卵形或倒棒状,常行程链,单生的较多,多具喙,淡橄榄褐至橄榄褐色或褐色,光滑或具瘤刺,具纵横膈膜[6,7]。以此为依据,二号菌的分生孢子、分生孢子梗、菌落形态及其形状特征在交链孢菌属的范围内,故二号菌菌应属于(图1),即交链孢菌为桂花叶枯病病原。
20140519094211.png
    3 结论与讨论
    本研究结果表明引起桂花叶枯病的病原应为交链孢菌属[又称链格孢属(Alternaria)]真菌,结论与杨翠莲[8]报道一致,而不是半知菌亚门、腔孢菌纲、球壳孢目、叶点霉属的木犀生叶点霉(Phyllostic-taosmanthicolaTrin)[9~12]。且桂花叶枯病发病率极高达到87.27%,严重程度较高达到25%。在防治桂花病害时,应加强对叶枯病的防治。
    病菌以菌丝体或分生孢子器在被害叶片上越冬。翌年春温度适宜时,分生孢子器产生大量的分生孢子,借风力传播到寄主植物上,病害发生多在7月~11月。高温高湿的气候,通风不良的环境,植株长势衰弱,均可促使发病状况更加严重。病菌发育的温度范围10℃ ~33℃ ,最适宜的温度为27℃左右[13,14]。因此,为防治叶枯病,应加强植株管理,喷洒药剂干扰和预防病原的传播、定植。
    叶枯病是桂花的重要叶部病害,危害广泛而严重。研究桂花叶枯病发病状况以及对其病原物的鉴定,再对症下药,严防桂花树大面积发病,降低经济、生态损失。至于桂花叶枯病菌可否作为交链孢菌的专化型或致病型还有待通过相互交叉接种,病菌的生理生化和遗传差异等方面作进一步深入研究。

参考文献:
[1] 馀明慧.园林植物病虫害防治[M].北京:中国林业出版社,1993:153.
[2] 雷洽祥.桂花主要病虫害的防治[J].广西植物,1996,5(6):312.
[3] 李树美,李兴昭.桂花叶枯病的防治[J].江西农机农业科技.种植篇,1999,5:21.
[4] 方中达,主编.植病研究方法[M].农业出版社,1987:112~159.
[5] 朱天辉,主编.园林植物病理学[M].北京:中国农业出版社,2003:330~331.
[6] 邵力平,沈瑞祥,张素轩,等.真菌分类学[M].北京:中国林业出版社,1984:317~318.
[7] 张中义,冷怀琼,张志铭,等.植物病原真菌学[M].成都:四川科学技术出版社,1988:374~376.
[8] 杨翠莲.桂花病虫害防治技术[J].林业建设,2001:30.
[9] 林志伟.厦门市桂花病虫害种类及防治[J].亚热带植物科学,2006,35(3):51~53.
[10] 雷洽祥.桂花主要病虫害的防治[J].Flowers,维普资讯,8.
[11] 易雄辉.桂花叶斑病的发生与防治[J].特种经济动植物,植物保护,2006(3):42.
[12] 吕世新,何李平,徐国绍,等.桂花病虫害防治技术初报[J].特种经济动植物,植物保护,2004(3):39.
[13] HuangJiade.TheoccurrenceandcontrolofthemaindiseaseandpestsinGuilinBotanicalGarden.Guihaia,1998,18(3):301.
[14] 季 荣,季晓波.桂花的繁育栽培与主要病虫害防治研究[J].上海农业科技,2005,6:111.

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